化学药品企业在药品研发、生产及质量控制过程中，高效液相色谱仪（HPLC）是核心分析设备之一，广泛应用于成分定量、杂质检测、稳定性研究、工艺验证及质量标准建立等环节。以下是化学药品企业需使用液相色谱仪的典型检测项目及应用场景：

一、原料药（API）检测

1. 含量测定

• 检测对象：主成分含量（如抗生素类、甾体激素类、心血管类药物）。

• 示例：

• 阿莫西林原料药：HPLC 法测定含量（《中国药典》规定按干燥品计算，含 C₁₆H₁₉N₃O₅S 不得少于 95.0%）。

• 布洛芬原料药：检测 R/S 异构体比例（需符合光学纯度要求）。

• 检测目的：确保原料药符合法定标准，保证药效。

2. 有关物质检查

• 检测对象：工艺杂质（如中间体、副产物）、降解产物（如氧化产物、水解产物）。

• 示例：

• 奥美拉唑原料药：检测杂质 A（5 - 甲氧基 - 2-[[(4 - 甲氧基 - 3,5 - 二甲基 - 2 - 吡啶基) 甲基] 亚磺酰基]-1H - 苯并咪唑）等特定杂质。

• 盐酸左氧氟沙星：检查光学异构体（右氧氟沙星），限量≤1.0%。

• 检测依据：《ICH Q3A (R2)：新原料药中的杂质》及各国药典。

3. 残留溶剂测定

• 检测对象：生产过程中残留的有机溶剂（如甲醇、乙腈、二氯甲烷）。

• 检测方法：HPLC-UV（挥发性较低的溶剂）或 HPLC-MS（痕量溶剂）。

• 限量标准：参照《ICH Q3C：残留溶剂指导原则》，如一类溶剂苯≤2ppm。

二、制剂检测

1. 含量均匀度与溶出度

• 检测对象：

• 小剂量制剂（如 25mg 以下片剂）的含量均匀度。

• 缓控释制剂、难溶性药物制剂的溶出曲线。

• 示例：

• 硝苯地平缓释片：采用 HPLC 测定不同时间点的释放量，与参比制剂对比溶出曲线。

• 检测目的：确保每片 / 粒药物的有效成分含量一致，且释放符合设计要求。

2. 稳定性研究

• 加速试验与长期试验：通过 HPLC 监测药物在不同条件（如高温、高湿、光照）下的降解产物。

• 示例：

• 阿司匹林肠溶片：检测水解产物水杨酸（加速试验中水杨酸含量不得超过 0.3%）。

• 数据用途：制定有效期、储存条件及包装材料选择依据。

3. 辅料相容性研究

• 检测对象：药物与辅料（如淀粉、纤维素衍生物）混合后的化学反应产物。

• 方法：将药物与辅料按比例混合，加速条件下放置，HPLC 检测新杂质生成。

• 目的：筛选适合的辅料，避免配伍禁忌。

三、质量控制与标准建立

1. 杂质谱分析

• 检测对象：全面鉴定与定量药物中的已知杂质、未知杂质。

• 方法：

• HPLC-MS/MS：对杂质进行结构确证（如分子量、碎片离子）。

• 二极管阵列检测器（DAD）：检测杂质的紫外吸收光谱，辅助定性。

• 标准制定：根据杂质毒性确定报告阈值（如 > 0.05% 需报告）、鉴定阈值（>0.10% 需鉴定）。

2. 效价测定

• 生物活性药物（如胰岛素、肝素）：通过 HPLC 测定活性成分含量，结合生物学方法（如效价测定）。

• 示例：

• 重组人胰岛素注射液：HPLC 法测定胰岛素含量，需符合《中国药典》效价要求（每 1mg 效价不得少于 26.0 单位）。

3. 基因毒性杂质检测

• 检测对象：潜在致癌物（如 N - 亚硝胺类、磺酸酯类）。

• 方法：HPLC-MS/MS（灵敏度可达 ng/g 级）。

• 典型案例：缬沙坦中 N - 亚硝基二甲胺（NDMA）的检测（限量≤0.3ppm）。

四、工艺验证与生产过程监控

1. 中间体监控

• 检测对象：合成过程中的关键中间体（如头孢类药物的 7-ACA）。

• 目的：优化反应条件，确保中间体质量符合下一步反应要求。

2. 清洁验证

• 检测对象：生产设备残留的药物活性成分、清洁剂。

• 方法：HPLC 检测设备表面擦拭样品或淋洗水。

• 接受标准：残留量≤10ppm 或前一批产品最小日剂量的 1/1000。

五、液相色谱技术在化药检测中的优势

1. 高灵敏度：

• 紫外检测器（UV）：检测限可达 μg/mL 级；

• 质谱联用（MS）：检测限低至 ng/mL 甚至 pg/mL，适用于痕量杂质分析。

2. 宽适用性：

• 反相色谱（RP-HPLC）：分析极性至中等极性化合物（如生物碱、苷类）；

• 正相色谱：分离极性较强的化合物（如糖、氨基酸）；

• 离子交换色谱：检测有机酸、有机碱及盐类。

3. 自动化与数据可靠性：

• 自动进样器：实现 24 小时连续检测，提高效率；

• 电子记录与审计追踪：满足 GMP、FDA 21 CFR Part 11 等法规对数据完整性的要求。

六、典型检测标准与法规依据

• 《中国药典》：化学药品的含量测定、有关物质检查等 90% 以上采用 HPLC 法。

• 国际人用药品注册技术协调会（ICH）：

• Q3A (R2)：原料药杂质；

• Q6A：新原料药和制剂的规格；

• Q1A (R2)：稳定性试验。

• 美国 FDA：《药物分析方法验证指南》（2018）。

总结

化学药品企业需根据药品类别（如小分子化药、多肽药物、寡核苷酸药物）及研发阶段（临床前、临床、上市后），配置不同类型的液相色谱系统。例如：

• 常规检测：配置 HPLC-UV/DAD 系统，满足含量测定、有关物质检查；

• 高端需求：配备 HPLC-MS/MS 系统，用于基因毒性杂质、生物药分析；

• 特殊样品：使用超高效液相色谱（UPLC）缩短分析时间，提高分离效率。
  通过液相色谱技术的精准应用，企业可实现从原料采购、生产过程到成品放行的全生命周期质量控制，确保药品安全、有效、质量可控。